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多抗制備基于機體免疫系統對抗原的識別和免疫應答過程

更新時間:2025-07-10點擊次數:14
  多克隆抗體(polyclonal antibody,多抗)是由多種不同的 B 細胞克隆針對抗原物質產生的多樣化抗體混合物。多抗制備主要基于機體免疫系統對抗原的識別和免疫應答過程。
 
  當將抗原物質注入動物體(如小鼠、大鼠、兔子等)后,動物的免疫系統會被激活??乖蔬f細胞(如樹突狀細胞)會攝取、加工抗原,并將其呈遞給輔助性 T 細胞。輔助性 T 細胞被激活后,會釋放細胞因子,刺激 B 細胞的增殖和分化。B 細胞表面的 B 細胞受體能夠特異性地識別抗原的不同表位。每一個 B 細胞克隆只能識別抗原上的一種特定表位,在抗原的刺激以及輔助性 T 細胞的輔助下,這些 B 細胞會大量增殖并分化為漿細胞。漿細胞則可以分泌針對相應表位的抗體,這些來自不同 B 細胞克隆的抗體混合在一起,就形成了多克隆抗體。
 
  由于抗原通常具有多個不同的表位,所以能夠引發機體產生針對多個表位的抗體。這些抗體在特異性、親和力等方面存在差異,但共同作用于抗原,可以從不同角度對抗原進行識別和結合,從而實現對抗原的檢測、定位或中和等功能。
多克隆抗體
 
  多抗制備的測定步驟:
 
  1.抗原準備:選擇合適的抗原,如純化蛋白、肽段、重組抗原等,確保其純度和免疫原性。
 
  2.免疫動物:
 
  -選擇動物:通常選用兔子、山羊等,兔子是多抗制備的,因其體積大,每次可抽取較多血清,且反應良好。
 
  -初次免疫:將抗原與弗氏佐劑等比例混合,充分乳化后,在動物背部多點皮下注射或肌肉注射。
 
  -加強免疫:初次免疫后間隔一定時間(如2~4周),用抗原與弗氏佐劑乳化后進行多次加強免疫,以提高抗體效價。
 
  3.采血與血清分離:
 
  -采血:在免疫過程中定期采血,檢測抗體效價。采血可在加強免疫后達到預期效價時進行,可采用頸動脈放血等方式獲取大量抗血清。
 
  -血清分離:采集的血液在37℃烘箱放置一段時間后,轉移到4℃沉淀過夜,離心后收集上清即為血清,也可自然析出血清。
 
  4.抗體純化:
 
  -親和純化:如蛋白A/G親和純化可富集免疫球蛋白G(IgG),除去大量非特異性蛋白,但可能仍有非特異性IgG殘留;抗原特異性親和純化可進一步去除非特異性IgG組分,富集特異性免疫球蛋白。
 
  -其他純化方法:還可結合離子交換層析、凝膠過濾層析等方法提高抗體純度。
 
  5.抗體鑒定:
 
  -效價測定:常用酶聯免疫吸附試驗(ELISA)測定抗體效價,即將抗體倍比稀釋后與抗原反應,通過檢測吸光值確定效價。
 
  -特異性檢測:可通過免疫印跡(Western Blot)、免疫組織化學等方法檢測抗體對目標抗原的特異性識別能力。

上一個:沒有了

下一個:免疫原是單抗制備的關鍵要素

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