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免疫原是單抗制備的關鍵要素

更新時間:2025-06-05點擊次數:78
  免疫原是單抗制備的關鍵要素,其選擇需依據目標抗體的特異性和重要性。常用的免疫原包括蛋白質、多肽、多糖、細胞表面分子等。為增強免疫原性,通常會將免疫原與佐劑混合,以提升其在免疫過程中的刺激效果。
 
  動物免疫的目的在于使動物(如小鼠、大鼠等)產生針對目標抗原的免疫反應。將選定的免疫原與佐劑充分混合后,通過特定的注射途徑(如腹腔注射、皮下注射等)注入動物體內。在初次免疫后的一段時間內,還需進行多次加強免疫,以確保動物體內能產生足夠數量和高親和力的特異性抗體分泌B細胞。
 
  在動物免疫達到預期效果后,提取動物脾臟中的B淋巴細胞。這些B淋巴細胞能夠分泌針對目標抗原的特異性抗體,但由于其本身不能在體外長期存活和增殖,需要與骨髓瘤細胞進行融合。骨髓瘤細胞具有無限增殖的特性,通過融合劑的作用,使B淋巴細胞與骨髓瘤細胞融合形成雜交瘤細胞。這種融合技術基于細胞膜的流動性和細胞的自我修復能力,形成的雜交瘤細胞既具備B淋巴細胞分泌特異性抗體的能力,又擁有骨髓瘤細胞的無限增殖特性。
單抗制備
 
  單抗制備的注意事項:
 
  1.儲存與運輸:
 
  -單抗應儲存于-20℃至-80℃,避免反復凍融;運輸時需保持低溫并避光。
 
  -長期保存可添加BSA或甘油作為保護劑,防止蛋白變性。
 
  2.操作規范:
 
  -實驗過程中需嚴格無菌操作,避免微生物污染;使用一次性耗材減少交叉污染風險。
 
  -單抗稀釋時應使用PBS或專用稀釋液,避免使用含疊氮鈉(NaN3)的緩沖液。
 
  3.安全性與倫理:
 
  -動物實驗需遵循“替代、減少、優化”原則,減少免疫動物的痛苦。
 
  -臨床級單抗需通過病毒滅活和去除內毒素處理,確保安全性。
 
  4.應用限制:
 
  -單抗可能存在物種交叉反應性差異,使用前需驗證其與目標物種的兼容性。
 
  -治療性單抗需監測免疫原性(如HAMA反應),避免引起人體免疫排斥。
 
  5.質量控制:
 
  -每批單抗需進行效價、純度、活性等關鍵指標的檢測,確保批次間一致性。
 
  -腹水來源的單抗需去除雜蛋白(如小鼠IgG),并通過親和層析純化。
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