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對多克隆抗體制備你了解多少?

更新時間:2025-01-10點擊次數(shù):284
  多克隆抗體制備是一個涉及多個步驟和精細(xì)操作的過程,其目的是通過免疫動物(通常是兔子或小鼠)來生成能夠識別特定抗原的多種抗體混合物。
 
  一、抗原準(zhǔn)備
 
  1.抗原的選擇與處理:抗原是能引起機(jī)體免疫反應(yīng)的物質(zhì),具有抗原性和免疫原性。抗原通常需要經(jīng)過純化,以確保其純度和特異性。對于半抗原,需要偶聯(lián)到大分子載體蛋白上,如BSA、OVA或HSA,以增強(qiáng)其免疫原性。
 
  2.抗原的乳化:將抗原與佐劑按一定比例混合,并通過劇烈振蕩使其充分乳化。乳化過程至關(guān)重要,因為未乳化的抗原會影響免疫效果。
 
  二、免疫動物
 
  1.動物選擇:常用的免疫動物包括新西蘭大白兔、日本大耳白兔等。選擇健康、體重適中的動物,并確保它們在免疫前已適應(yīng)新環(huán)境。
 
  2.免疫方案:根據(jù)抗原的性質(zhì)和所需抗體的量,制定合適的免疫方案。通常采用皮下或皮內(nèi)多點注射法,每隔一定時間(如2-4周)進(jìn)行一次免疫,共免疫數(shù)次(如4-5次)。
 
  3.血清收集:在每次免疫后的一段時間內(nèi)(如7-10天),通過心臟采血或頸動脈放血等方式收集血液。收集的血液需置于37℃烘箱中凝固,然后轉(zhuǎn)入4℃過夜,通過離心分離出血清。
 
  三、多克隆抗體的檢測與純化
 
  1.效價檢測:通過ELISA、WesternBlot等方法檢測抗血清的效價和特異性。效價達(dá)到一定水平后,即可進(jìn)行抗體的純化。
 
  2.抗體純化:采用親和層析等方法對抗體進(jìn)行純化。例如,將抗原偶聯(lián)到CNBr-activatedSepharose4B上,制備成親和層析柱。然后將抗血清通過親和層析柱,使特異性抗體與抗原結(jié)合,再通過改變pH值或使用洗脫液將抗體從柱上洗脫下來。
 
  3.抗體保存:純化后的抗體可以加入甘油等保護(hù)劑,分裝后儲存于-20℃或更低溫度下,以保持其活性和穩(wěn)定性。
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