蛋白掛柱后洗脫不下來主要是因為蛋白和柱子結合能力太強或者洗脫條件太溫和，我們可以從以下幾方面考慮解決問題。

1、洗脫條件太溫和：重新摸索洗脫條件，增加緩沖液中咪唑濃度或者適當降低緩沖液pH以確定最佳的洗脫條件或者更、換緩沖液的成分（換成tris-HCl緩沖液）。

2、蛋白在柱子中沉淀：適當降低上樣量或蛋白濃度，用咪唑線性洗脫。使用添加劑或者改變NaCl的濃度，或者在變性的條件下洗脫（加4-8M的尿素或者4-6M的鹽酸胍）。

3、非特異性的疏水或者其他作用：在洗脫液中加非離子的添加劑（例如0.2%的Triton X-100）或者增加NaCl的濃度。

4、蛋白和柱子接觸時間過長：可以減少蛋白和柱子的接觸時間。